一、原理

    禽流感（H9亚型）病毒能够与鸡红细胞发生凝集现象，这种红细胞凝集现象可被特异一性免疫血清所抑制，即红细胞凝集抑制实验(HI)。

二、适用范围

  本抗原主要用于禽流感（H9亚型）的诊断和疫苗免疫抗体的检测。

三、实验器材

    禽流感（H9亚型）抗原、0.5％红细胞、灭菌生理盐水、被检血清、96孔V型板、微量移液器等。

四、实验方法

1．血凝实验(HA)

1）取洁：争96孔V型板，用移液器从第1孔至1 2孔各加生理盐水50微升。

2）用移液器吸取禽流感（H9亚型）抗原液50微升加入第一孔并吹打3—5次。使其与生理盐水充分混匀后，依次倍比稀释至11孔弃去，12孔不加抗原作对照。

3）用移液器向1～12孔加0.5％的红细胞悬液50微升。

4）震荡15秒后置37℃温箱中20分钟，观察结果。

5）结果判定：能使红细胞完全凝集的抗原最大稀释倍数，即抗原血凝价。

2．血凝抑制实验（HI）

1)血凝抑制实验首先需配制4单位、2单位病毒。假设抗原HA实验测定其凝集价为1：512，则病毒液50微升内须含4个凝集单位，即1：128，将抗原用生理盐水稀释128倍即为4单位病毒，稀释256倍即为2单位病毒。

2）用移液器吸取生理盐水50微升加入96孔 V型板的第1孔，第2孔加50微升4单位病毒，第3—1 2孔全部滴加50微升2单位病毒。

3）吸取被检血清50微升加入第1孔混匀后，依次倍比稀释至11孔弃去。（第11孔为生理盐水对照，第12孔为抗原对照）

4）将第1至第12孔全部加入50微升红细胞。

5）震荡15秒后置37℃温箱中20分钟观察结果。

6）结果判定：能完全抑制红细胞凝集的血清最高稀释倍数为该血清的凝集抑制效价。第1孔对照完全不凝集，第12孔抗原对照完全凝集时则表示对照成立。反之则不成立。在对照成立时，才可判定结果。

五、物理性状：

    1．呈黄褐色液体。

    2．-10℃以下为液体。

六、注意事项

    1．实验用待检血清必须新鲜，腐败者不能使用。

    2．HI抗原在实验前需先测定其效价。

    3．来源不同的鸡红细胞对其效价可能有一定影响。

七、保存

    于-10℃以下保存一年。